Цитотоксический эффект вакцинных препаратов

Влияние вакцинных препаратов оценивали по их цитотоксическому эффекту на клетки и фагоцитарной активности последних. Для выявления цитотоксического действия суспензию клеток разливали по лункам 60-луночных планшет для иммунологических исследований. В каждую лунку помещали по 60 тысяч клеток в 25 мкл среды.

Планшеты плотно закрывали крышкой и культивировали в термостате при 37°С в течение 2 часов для адгезии макрофагоподобных клеток к пластику. После этого неприлипшие клетки удаляли, стандартно встряхивая планшеты. В лунки добавляли исследуемые препараты (ЧВ, ОВ, секстаанатоксин, ВЖЛ, холерная вакцина, вакцина ВЭЛ) в различных разведениях и сочетаниях. Время совместной инкубации с вакцинами и их сочетаниями составляло 2 часа, было подобрано экспериментально, при меньшей экспозиции цитотоксическое действие вакцин было незначительным.

Через 2 часа содержимое лунок удаляли с помощью микропипеток и фильтровальной бумаги. В каждую лунку наливали 0,2 %-ный раствор трипанового синего на 2 минуты (20 мкл). После удаления раствора красителя клетки один раз отмывали питательной средой, наливали ее во все лунки и сразу же подсчитывали процентное содержание нежизнеспособных клеток путем визуального исследования лунок с помощью микроскопии (объектив х20, окуляр х7 с сеткой). При этом подсчитывали число мертвых клеток (синих) на 100 клеток.

Обратите внимание

Консультация у врача — залог вашего здоровья. Не пренебрегайте личной безопасностью и всегда обращайтесь к доктору вовремя.