Метод хемотаксиса под агарозой

Метод хемотаксиса под агарозой — метод определения хемотаксиса по способности лейкоцитов мигрировать на определенное расстояние под слоем агарозы. Широко используется в клинической и экспериментальной иммунологии.

Заключается в следующем. В чашки Петри диаметром 40 мм наливают слой агарозы и после ее застывания специальным пробойником проделывают в ней цилиндрической формы 3 лунки (объемом 10 мкл) на расстоянии 10 мм одна от другой.

В центральную лунку вносят суспензию лейкоцитов, в левую — хемоаттрактант (опыт), в правую — культуральную среду (контроль). Чашки ставят в термостат примерно на 4 часа. Затем в них наливают формалин (для фиксации клеток) и через 30-60 мин осторожно снимают слой агарозы. После этого чашки промывают дистиллированной водой, а дно их окрашивают.

Результаты миграции лейкоцитов опытных и контрольных проб под слоем агарозы в направлении градиента хемоаттрактанта и контрольной жидкости (культуральная среда) оценивают путем измерения зон миграции. На основании полученных данных по формуле рассчитывают хемотаксический индекс.

Обратите внимание