Иммуноблотинг

Иммуноблотинг — метод идентификации антигенов или антител. Заключается в следующем. Смесь антигенов инфекционного агента разделяют методом электрофореза в полиакриламидном геле. При этом белки в зависимости от молекулярной массы и заряда, под действием электичского поля мигрируют на разные расстояния от стартовой лунки.

Затем гель накладывают на нитроцеллюлозную пластину и вновь подвергают электрофорезу. Белки из геля мигрируют в поры нитроцеллюлозы и связываются с ней ковалентно. После этого нитроцеллюлозную пластину обрабатывают сывороткой, содержащей специфические антитела к антигенам инфекционного агента. Антитела при взаимодействии с антигенами образуют иммунные комплексы. Несвязавшиеся с фиксированными антигенами в нитроцеллюлозной пластине антитела отмывают.

Локализацию иммунных комплексов осуществляют с помощью конъюгатов антивидовых антител с ферментом и хромогенного субстрата (т.е. проводят реакцию ИФА). При добавлении субстрата происходит его расщепление ферментом и вследствие этого — окрашивание полос преципитации Метод широко используется в качестве подтверждающего (конфирматорного) теста при диагностике ВИЧ- и др. инфекций.

Обратите внимание
Консультация у врача — залог вашего здоровья. Не пренебрегайте личной безопасностью и всегда обращайтесь к доктору вовремя.