Методы и реакции в иммунодиагностике паразитарных заболеваний

В настоящее время имеется большой набор иммунологических реакций.

Методы, используемые для диагностики паразитарных болезней, должны отвечать следующим требованиям: быть специфичными, чувствительными, простыми в использовании, особенно для массовых обследований, способствовать выявлению инфекции, так как от их разрешающей способности зависит правильность диагностики. Поэтому одни методы могут быть использованы в хорошо оснащенных лабораториях (например, реакция иммунофлюоресценции — РИФ), другие — могут применяться в полевых условиях (например, агглютинационные тесты).

Основными трудностями при создании таких диагностических систем являются выбор антигена, его очистка, приготовление, фиксация на носителях.

В связи с тем, что антигенные компоненты паразита могут находиться в различных участках его тела, исследователи используют в зависимости от применяемого метода диагностики целых паразитов, экстракты из тканей паразита, экскреторно-секреторные продукты жизнедеятельности и фракции антигенов из экстрактов паразитов.

Одним из методов диагностики паразитарных болезней является аллергическая внутрикожная проба. К достоинствам этого метода следует отнести высокую чувствительность, простоту использования, удобство при массовых обследованиях. Однако аллергическая проба недостаточно специфична. Кроме того, при ее применении возникает опасность сенсибилизации организма. Но в некоторых случаях, как, например, при токсоплазмозе, это один из широко применяемых методов диагностики.

Среди серологических реакций одной из первых была разработана реакция связывания комплемента (РСК). Эта реакция очень широко применялась практически для диагностики всех гельминтозов и многих протозоозов. Однако реакция очень трудоемка, сложна при постановке, требует множества контролен для всех компонентов диагностической системы. Особенно нестабильным является комплемент. Эту реакцию не ставят в полевых условиях. В настоящее время существуют более современные методы.

Широкое распространение в диагностике паразитарных болезней нашли методы, основанные на феномене агглютинации — агглютинация паразитов в иммунной сыворотке, как, например, реакция агглютинации крупных шизонтов при малярии — SICA.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) — одна из самых простых, удобных для использования в лабораторных условиях, причем в любой лаборатории, независимо от ее оснащенности. При применении стабилизированного носителя антигена (формалинизированные эритроциты) диагностикум может использоваться долгое время. Постановка реакции в микроварианте с применением микротитратора Такачи позволяет автоматизировать процесс постановки и расходовать малые количества реагентов.

Из всех реакций, которые основаны на феномене преципитации, наиболее часто используется реакция иммунодиффузии (РИД) в гель. Постановка реакции проста, ее можно исполь зовать для диагностики в любой лаборатории.

Более быстрой и информативной является реакция иммуноэлектрофореза (ИЭФ). Постановка этой реакции несколько сложнее из-за необходимости использования специального оборудования. Большим преимуществом РИД и ИЭФ перед другими методами является возможность выявления с их помощью спектра антител в сыворотках, идентификации их. Кроме того, можно охарактеризовать антигенный спектр. Широко используют для реакции микропреципитация живых личинок, яйца, сколексы.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) высоко чувствительна и специфична. Она широко используется в иммунодиагностике паразитарных болезней в тех случаях, когда легко доступен антиген, как, например, при токсоплазмозе, и более ограниченно в случаях, когда антиген мало доступен, например при малярии и токсокарозе. В полевых условиях РИФ не ставится, так как чтение реакции проводится при помощи специального люминесцентного микроскопа, кроме того, правильность ответа во многом зависит от квалификации и опыта специалиста, проводящего исследование.

Новым методом исследования является реакция энзим-меченых антител (РЭМА). Принцип количественного метода основан на соединении антигена, адсорбированного на полистироловой основе, с антителом в сыворотке. Этот комплекс выявляется конъюгатом, несущим фермент, который активен в сочетании с определенным субстратом. В результате этой ферментной реакции выявляется комплекс антиген — антитело. Метод отличается высокой чувствительностью.

Модификацией РЭМА является иммунопероксидазная проба (ИПП). В постановке этот метод сходен с РИФ, разница лишь в том, что в качестве метки используют не флюоресцеин, а фермент. По чувствительности ИПП не превышает РИФ, но метод имеет то преимущество, что при оценке реакции можно пользоваться не флюоресцентным микроскопом, а обычным световым, что дает возможность шире использовать этот метод, чем РИФ.

Реакция Сэбина—Фельдмана (РСФ), или, как ее также называют, реакция с красителем, которая применяется только при токсоплазмозе дает возможность получить довольно точные сведения об изменении иммунологического состояния организма, зараженного токсоплазмозом, а также выявить антитела, относящиеся к классам IgM и IgG, причем наиболее тонко отражает изменения, связанные с антителами, относящимися к фракции IgM. Следует учитывать не только наличие, но и уровень иммуноглобулинов того или иного класса и при других паразитарных болезнях, так как известно, что на определенных стадиях развития паразитов уровень иммуноглобулинов разных классов различен.

В последнее время при изучении паразитарных заболеваний все шире стали применять методы исследования клеточного звена иммунитета. Наиболее часто используют реакцию бласттраисформации (РБТ) и розеткообразования (РО), РБТ лимфоцитов периферической крови в присутствии неспецифического стимулятора — фитогемагглютинина (ФГА) позволяет выявить способность лимфоцитов трансформироваться в бласты. При добавлении антигена или митогена (ФГА) можно расшифровать информацию о направленном ответе иммунной системы. Реакция очень трудоемкая, требует специального оборудования и выполняется в условиях бокса.

Существуют спонтанное и иммунное розеткообразования В первой реакции проводится характеристика Т-системы лимфоцитов, во второй — В-системы. Реакция доступна для постановки в оснащенных лабораториях.

Обратите внимание