Методы определения противовирусных антител

Для количественного определения противовирусных антител можно использовать реакцию нейтрализации в культуре клеток, реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) и иммуноферментный анализ — ИФА (англ. — ELISA, или enzyme-linked immunosorbent assay).

В основе реакции нейтрализации лежит способность вирусов размножаться в чувствительных к ним культурах клеток и вызывать при этом дегенеративные морфологические изменения (цитопатический эффект). Если в исследуемом образце имеются соответствующие специфические антитела, вирус будет нейтрализован и трансформируется в неактивную форму, в результате чего он утратит способность производить цитопатический эффект. Хотя нейтрализующие антитела имеют наибольшее значение в процессах выздоровления больного от инфекции и формирования постинфекционного иммунитета, реакцию нейтрализации в практических лабораториях используют редко, так как она достаточно дорогая и требует больших затрат времени.

Некоторые вирусы обладают гемагглютинирующими свойствами, т.е. эти вирусы могут связываться с эритроцитами и образовывать осадок склеившихся эритроцитов на дне пробирки или лунки специального планшета. Избирательное блокирование гемадсорбции с помощью специфических антител является основой для проведения реакции торможения гемагглютинации, которая широко используется в лабораторной практике.

При проведении непрямого ИФА антитела, находящиеся в исследуемом материале, взаимодействуют и образуют иммунные комплексы с антигеном — гомологичными вирусами или их антигенами, предварительно адсорбированными на поверхности лунок полистироловых планшетов или на поверхности пластиковых шариков. Затем на образовавшийся комплекс «антиген-антитело» наслаивают меченные ферментом антитела к человеческим антителам (чаще всего — антитела к человеческому IgG). Количество ферментной метки, связавшейся с твердой основой, является индикатором количества антител в исследуемом материале и может быть определено по степени разрушения субстрата, соответствующего ферменту, использованному для метки антител. Обычно субстрат для фермента подбирают таким образом, чтобы в конечном счете происходило изменение цвета реагентов, что можно оценивать визуально или с помощью фотометрии.

Обратите внимание