Рекция нейтрализации в микрокультурах клеток

В основу реакции нейтрализации в клеточных микрокультурах положены наблюдения о том, что жизнеспособность клеток млекопитающих в культурах ингибируется дифтерийным токсином. Этот эффект нейтрализуется в тех случаях, когда в исследуемых образцах сыворотки крови присутствуют антитоксические антитела.

Титрование антитоксических антител в исследуемых сыворотках проводят в полистироловых планшетах для микрокультур клеток, в лунках которых исследуемые сыворотки смешивают с соответствующим токсином. После кратковременной инкубации в лунки вносят суспензию клеток Vero или HeLa в соответствующей питательной среде. После инкубации в течение 3—4 дней результаты теста учитывают по изменению цвета реагентов в лунках микропланшета. Эта динамика цвета связана с образованием кислых продуктов метаболизма, которые изменяют рН питательной среды. Клетки Vero более чувствительны к дифтерийному токсину, поскольку они имеют большое количество точек связывания (рецепторов). Кроме того, их реакция с токсином отличается высокой специфичностью и зависит от времени и температуры. Если данное разведение сыворотки содержит антитела в избыточном количестве, клетки продолжают расти, в результате чего красный цвет среды меняется на желтый.

В последние годы реакция нейтрализации в клеточных микрокультурах была модифицирована, что позволяет теперь определять с помощью спектрофотометра точки эквивалентности между токсином и антитоксическими антителами, а также измерять величину адсорбции с помощью компьютерного анализа.

Реакция нейтрализации in vitro в клеточных микрокультурах является высокочувствительным (минимальная определяемая концентрация 0.005 МЕ/мл) методом, дает воспроизводимые результаты и требует минимального количества сывороток. При одной постановке реакции можно исследовать до 100 образцов сыворотки крови. Эту реакцию использовали для выявления противодифтерийных антител у людей и животных. При исследовании сывороток людей и морских свинок была выявлена хорошая корреляция результатов реакции нейтрализации in vitro и кожного теста нейтрализации in vivo на кроликах.

Недавно была разработана модифицированная реакция нейтрализации in vitro. Однако постановку всех реакций с использованием клеточных культур может производить только специально обученный персонал, имеющий навыки работы с культурами клеток; кроме того, необходимо иметь специальное лабораторное оборудование.

Обратите внимание