Реакция нейтрализации in vivo

С помощью реакции нейтрализации (PH) in vivo производят непосредственное определение активности противостолбнячных антител путем демонстрации токсиннейтрализующих свойств исследуемой сыворотки в организме лабораторных животных, обычно — мышей. Реакция нейтрализации является дорогостоящим методом, требует значительных затрат времени, наличия квалифицированного лабораторного персонала, большого количества животных и относительно большого объема исследуемой сыворотки. В то же время PH отличается высокой чувствительностью и позволяет выявлять антитела в титрах порядка 0,001 МЕ/мл. С помощью этой реакции определяют главным образом сывороточные антитела класса IgG.

Методы титрования противостолбнячных антител могут быть разделены на 3 группы. Методы 1-й группы основаны на предположении, что имеется тесная корреляция между средней продолжительностью жизни животных и количеством не нейтрализованного токсина, оставшегося в смеси исследуемой сыворотки с токсином. При использовании этих методов регистрируют точные сроки гибели мышей в течение 5 суток после введения животным смеси, состоящей из определенного количества стандартного токсина и различных разведений исследуемой сыворотки. Эти величины в виде соответствующих им логарифмов (“факторов коррекции”) используют для количественного выражения титров антитоксических антител. Этот метод не требует больших количеств материалов, но предусматривает необходимость частых контрольных наблюдений в течение 5 дней.

Методы 2-й группы основаны на учете результатов в «конечной точке», а именно на подсчете соотношения погибших и выживших животных в конце определенного периода наблюдения (обычно — 4 дня) после введения смеси токсина с тестируемой сывороткой. Главным недостатком этих методов является необходимость использования большого количества (от 1 до 2 мл) сыворотки крови для титрования в тех случаях, когда концентрация антител невысока.

Методами 3-й группы предусмотрена дифференцированная регистрация паралича конечностей у мышей, которым вводили смесь токсина и антител, и полной нейтрализации симптомов столбнячной инфекции. Поскольку дифференцировка между минимально выраженными параличами и полной нейтрализацией действия токсина весьма необъективна и в решающей мере зависит от субъективной оценки исследователя, использование данного критерия затруднительно и приводит к получению неточных результатов. При использовании данного метода требуется небольшое количество сыворотки, однако он позволяет определять антитела при их титрах не ниже 0,02 МЕ/мл.

Чувствительность PH и точность получаемых с ее помощью результатов зависят ОТ природы использованного токсина (нативный или очищенный), его количества и массы использованных мышей.

Обратите внимание